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    1.將偏光顯微鏡的聚光器換成暗視野聚光器。

    2.選用適當厚薄的載玻片(通常0.7-1.2 mm)及蓋玻片(通常0.17 mm)。在載玻片上滴上釀酒酵母或大腸桿菌懸液后加蓋玻片，制成水侵片。

    由干暗視好瑯光廿的數值孔徑值都較大(NA=1.2-1.4)，焦點較淺，因此，所選用的載玻片、蓋玻片不宜太厚，否則被檢物體無法調在聚光器焦點處。

    3.在聚光器上放一大消香柏油，并將制片放在鏡臺上。升起聚光器，使香柏油與載玻片接觸。

    在進行暗視好觀察時，聚光器與載玻片之間滴加的香柏油要充滿，不能有氣泡，否側照明光線于聚光鏡上面進行全面反射，達不到被檢物體，從而不能得到暗視野照明。

    4.用低倍物鏡(10x )調節亮度并康焦樣品，將光像光圈關小，在照暗視野中觀察到一亮環(圖Ⅲ-13)。

    5.通過調節聚光器對中螺旋使亮環位于視野的中心，使聚光器與物鏡的光軸一致。

    6.微調聚光器高度使亮環變成一亮斑，光斑越小越好，此時聚光器的焦點與標本一致，觀察效果最好。逐步擴大光源光圈。使光斑擴大，并略大于視野。

    7.選用合適放大倍數的物鏡.調節亮度并調焦進行觀察。

    8.觀察完畢，擦去獲光路上的香柏油，并參照普通光學偏光顯微鏡的要求，妥善清潔鏡頭及其他部件。